Редактирование KNIT обеспечивает точную вставку ДНК без двуцепочечных разрывов
Материал подготовлен искусственным интеллектом на основе нескольких источников — ссылки на оригиналы приведены ниже.
Исследователи сообщают о новом методе редактирования генов KNIT, который достигает до 89% эффективности вставки фрагментов ДНК размером до 10 т.п.н. без двуцепочечных разрывов. Метод снижает частоту нецелевых мутаций и транслокаций, а также был использован для создания CAR-T-клеток с эффективной противоопухолевой активностью у мышей.
Метод
Редактирование KNIT (CRISPR kilobase-scale nickase-targeting) объединяет никазу Cas9 с системой рекрутирования донора ДНК для вставки фрагментов размером от 0,7 до более 10 т.п.н. Метод эффективен в различных геномных локусах и типах клеток, достигая до 89% эффективности при значительном снижении частоты инделов и нецелевого редактирования. Улучшенная версия KNIT editor 2 повышает эффективность за счёт одной трансфекции.
Терапевтическое применение
В мутантных клетках с патологической мутацией KNIT восстановил нормальную экспрессию генов путём вставки терапевтического гена в безопасный локус или нативный локус. Метод позволил создать невирусные программируемые CAR-T-клетки без двуцепочечных разрывов с клинически значимой эффективностью. Сконструированные CAR-T-клетки проявляли эффективную противоопухолевую активность in vitro и на мышиных моделях.
Что дальше
Исследователи планируют дальнейшее развитие KNIT для применения in vivo и изучение его потенциала в персонализированной медицине. Остаётся неясным, можно ли масштабировать метод для клинического использования и как он соотносится с другими новыми технологиями редактирования генов.
1 источник
Редактирование KNIT обеспечивает точную вставку ДНК без двуцепочечных разрывов
